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进行PCR实验时我们应该注意哪些事项呢?

时间:2011-10-15 11:09来源:未知 作者:江子君 点击:
首先,要确定你的模板DNA的浓度大概是多少,太稀和太浓都影响PCR结果,通过多次调整浓度才得到较理想的结果。 其次,如果是自己提的DNA,要确保模板中没有酒精(提DNA最后一步,一定要等酒精挥发完才能加TE) 最重要的是要探索一个好的退火温度,退火温度的

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        首先,要确定你的模板DNA的浓度大概是多少,太稀和太浓都影响PCR结果,通过多次调整浓度才得到较理想的结果。

 

其次,如果是自己提的DNA,要确保模板中没有酒精(提DNA最后一步,一定要等酒精挥发完才能加TE

最重要的是要探索一个好的退火温度,退火温度的高低可以以0.5℃的梯度变化确定,假如参考值为61℃,先跑一次,看结果,如果拖尾很长,则一个一个梯度增加退火温度,但不能增得太急。

尽量保证核酸纯净并控制浓度:浓度太低模板量不足,浓度太高杂质含量也就高,易影响Taq酶活性

操作尽量在冰上,传说Taq酶比较脆弱

据说加点BSA可以减少引物二聚体的形成并保护Taq酶的活性

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(责任编辑:admin3)
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